Almacenador intermediario biológico Trometamol de la base 77-86-1 de Tris

Base Tris 77-86-1 tampón biológico Trometamol

Uso del tampón de Tris en la electroforesis de proteínas y el Western Blotting

Los amortiguadores Tris son parte integral de la electroforesis de proteínas y el blotting occidental. La mayoría de los geles SDS-PAGE, los amortiguadores en funcionamiento y los amortiguadores de blotting están amortiguados con Tris.Todos los amortiguadores comunes están disponibles premezclados, o, si prefiere hacer su propio tampón Tris, puede comenzar con polvo Tris purificado, glicina y otros reactivos tampón de biología molecular.

La mayoría de los geles SDS utilizan un sistema de tampón Tris discontinuo.8A este pH, los iones de cloruro ionizados migran rápidamente, elevando el pH detrás de ellos y creando un gradiente de voltaje con una zona de baja conductividad.lo que hace que la glicina (del amortiguador en funcionamiento) se ionice y migre detrás del frente de cloruroLa mayoría de los péptidos de la muestra, que tienen una carga negativa debido al SDS unido, migran entre el cloruro y la glicina, formando una banda estrecha y, por lo tanto, se "apilan".

Una vez que la pila alcanza el gel de resolución, que está en un pH más alto (normalmente pH 8.7?? 8.8), el aumento de la ionización de la glicina hace que acelere y supere a los péptidos.el tamaño más pequeño de los poros del gel de resolución comienza a tener un efecto de tamizado, lo que resulta en la separación de los péptidos por tamaño.

La mayoría de los protocolos occidentales de blotting utilizan un amortiguador Tris de baja fuerza iónica para la transferencia de proteínas.

Uso del tampón de Tris en la electroforesis por agarosa de ácido nucleico

Los amortiguadores de Tris se utilizan ampliamente para la electroforesis de ADN con agarosa.Aunque hay algunas diferencias en la resolución de diferentes formas de ADN y su movilidad durante la electroforesisLos iones borato en TBE inhiben muchas enzimas, así que sin realizar algún tipo de purificación del ADN después de la electroforesis,Algunas manipulaciones en el río abajo mediadas por enzimas pueden no funcionar.Por lo tanto, el tampón TAE es el preferido para el uso diario en la mayoría de los laboratorios de ADN.

Haciendo un amortiguador Tris

El amortiguador Tris es una buena opción para la mayoría de los sistemas biológicos porque tiene un pKa de aproximadamente 8,1 a 25 °C, lo que lo convierte en un amortiguador efectivo en el rango de pH 7−9.Este rango de pH es adecuado para la mayoría de los procesos biológicosEl polvo de Tris también es menos costoso y más robusto que los amortiguadores más especializados como el HEPES.

Hay dos maneras de hacer una solución tampón de Tris. Uno es hacer soluciones de Tris base y Tris HCl, ambos en la concentración deseada,y luego añadir aliquotas de una solución (generalmente Tris HCl) a la otra solución (generalmente Tris base) mientras se controla el pH hasta obtener el pH correctoEn la práctica, esto se hace muy raramente.

El método habitual para fabricar la mayoría de los amortiguadores de Tris comúnmente utilizados es comenzar con solo la base de Tris.y luego el amortiguador se compone hasta el volumen deseadoSuponiendo que no haya un exceso al ajustar el pH, este método no cambia la resistencia iónica.o utilizando Tris HCl y ajustando el pH con NaOHDependiendo del uso previsto del amortiguador Tris, tal cambio puede o no ser importante.

Al hacer un tampón Tris, es importante utilizar un electrodo compatible con Tris al ajustar el pH.Los electrodos Ag/AgCl de unión única pueden mostrar inestabilidad cuando se usan con tampones Tris porque la plata precipita gradualmente y obstruye el electrodoEl uso de electrodos de referencia de doble unión o calomel garantiza mediciones precisas del pH en el búfer Tris.