Almacenador intermediario biológico Trometamol de la base 77-86-1 de Tris

Almacenador intermediario biológico Trometamol de la base 77-86-1 de Tris

Aplicaciones del almacenador intermediario de Tris en electroforesis de la proteína y borrar occidental

Los almacenadores intermediarios de Tris son integrales a la electroforesis de la proteína y a borrar occidental. La mayoría de los geles de SDS-PAGE, de los almacenadores intermediarios de funcionamiento, y de los almacenadores intermediarios que borran se protegen con Tris. Todos los almacenadores intermediarios comunes son haber premezclado disponible, o, si usted prefiere hacer su propio almacenador intermediario de Tris, usted puede comenzar con el polvo purificado de Tris, la glicocola, y otros reactivo del almacenador intermediario del grado de la biología molecular.

La mayoría de los geles del SDS utilizan un sistema discontinuo del almacenador intermediario de Tris. El gel de amontonamiento, que tiene poros grandes de modo que péptidos más grandes puedan emigrar fácilmente a través, se formula generalmente en pH 6.7-6.8. En este pH, los iones ionizados del cloruro emigran rápidamente, aumentando el pH detrás de ellos y creando una pendiente del voltaje con una zona de la conductividad baja, que hace la glicocola (del almacenador intermediario corriente) ionizar y emigrar detrás del frente del cloruro. La mayoría de los péptidos en la muestra, que tienen una carga negativa debido al límite SDS, emigran entre el cloruro y la glicocola, formando una banda estrecha y así de “amontonamiento”.

Una vez que la pila alcanza el gel de resolución, que está en un más de gran alcalinidad (típicamente pH 8.7-8.8), la ionización creciente de la glicocola la hace acelerar y alcanzar los péptidos. Además, el tamaño más pequeño del poro del gel de resolución comienza a tener un efecto de tamizado, dando por resultado la separación de péptidos por tamaño.

La mayoría de los protocolos que borran occidentales utilizan un almacenador intermediario de Tris de la fuerza iónica baja para la transferencia de la proteína. El tiempo de transferencia depende del tipo de aparato que borra y de la gama de tallas del péptido de interés.

Uso del almacenador intermediario de Tris en electroforesis ácida nucléica de la agarosa

Los almacenadores intermediarios de Tris son ampliamente utilizados para la electroforesis de la agarosa de la DNA. Los dos almacenadores intermediarios principales son TBE (Tris borate/EDTA) y TAE (Tris acetate/EDTA). Aunque haya algunas diferencias en la resolución de diversas formas de DNA y de su movilidad durante electroforesis, estos almacenadores intermediarios de Tris se pueden utilizar generalmente alternativamente. Los iones del borato en TBE inhiben muchas enzimas, tan sin la ejecución de algún tipo de purificación de la DNA después de electroforesis, algunas manipulaciones rio abajo enzima-mediadas pueden no trabajar. Por lo tanto, el almacenador intermediario de TAE se favorece para el uso diario en la mayoría de los laboratorios de la DNA.

Fabricación de un almacenador intermediario de Tris

El almacenador intermediario de Tris es una buena opción para la mayoría de los sistemas biológicos porque tiene un pKa de aproximadamente 8,1 en 25°C, haciéndole un almacenador intermediario eficaz en el rango de pH 7-9. Esta gama del pH es conveniente para la mayoría de procesos biológicos. El polvo de Tris es también menos costoso y más robusto que almacenadores intermediarios especializados tales como HEPES.

Hay dos maneras de hacer un Tris la solución tampón. Uno es hacer soluciones de la base de Tris y del ácido clorhídrico de Tris, en la concentración deseada, y después añade partes alícuotas de una solución (generalmente ácido clorhídrico de Tris) a la otra (generalmente solución de la base de Tris) mientras que supervisa el pH hasta que se obtenga el pH correcto. En la práctica, esto se hace muy raramente.

El método de hacer usual la mayor parte de los almacenadores intermediarios de uso general de Tris es comenzar con solamente la base de Tris. La cantidad apropiada de polvo de Tris se disuelve en agua, el pH se ajusta con el ácido clorhídrico, y entonces el almacenador intermediario se compone al volumen deseado. Si se asume que hay ningún llegue más allá mientras que ajusta el pH, este método no cambia la fuerza iónica. Sin embargo, después de llegue más allá y reajustando con el NaOH, o con el ácido clorhídrico de Tris y ajustando el pH con el NaOH, hay un cambio en fuerza iónica. Dependiendo del uso previsto del almacenador intermediario de Tris, tal cambio puede o no puede ser importante.

Al hacer un almacenador intermediario de Tris, es importante utilizar un electrodo Tris-compatible al ajustar el pH. los electrodos del Solo-empalme Ag/AgCl pueden exhibir inestabilidad cuando están utilizados con los almacenadores intermediarios de Tris porque la plata precipita y estorba gradualmente el electrodo. El uso de los electrodos de referencia del doble-empalme o del calomel asegura medidas exactas del pH en el almacenador intermediario de Tris.